電泳過程至關(guān)重要,稍有不慎我們就只能對著 「微笑線」和 「皺眉線」 嘆氣,而質(zhì)量好的電泳能讓目的條帶整齊,結(jié)果圖讓人眼前一亮。電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠,該凝膠的聚合則由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。
細(xì)胞爬片是一種將細(xì)胞培養(yǎng)在玻璃或塑料表面上,使其附著并擴(kuò)展的技術(shù)。這種技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運動、細(xì)胞-細(xì)胞相互作用等。我們在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量完全決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。
蛋白質(zhì)組學(xué)可以利用蛋白微數(shù)列、電泳和質(zhì)譜分析法檢測、識別和特征標(biāo)記的蛋白進(jìn)行分析。這些方法有其獨特的優(yōu)點和局限性,根據(jù)各自能力評估蛋白質(zhì)組譜。
細(xì)胞裂解成分一般使用的是表面活性劑,常用的有曲拉通X-100(Triton X-100)、脫氧膽(deoxycholate)、乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P40,NP-40)、十二烷基磺酸鈉(SDS)。其中Triton X-100和NP-40為非離子型,deoxycholate和SDS為離子型。不同裂解成分的裂解強(qiáng)度不同,一般來說Triton X-100和SDS的裂解能力較強(qiáng),deoxycholate和NP-40的裂解效果較為溫和,可以根據(jù)不同的實驗需求選用不同的裂解液。
標(biāo)準(zhǔn)品的制備是非常復(fù)雜的問題,也是標(biāo)記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標(biāo)準(zhǔn)品(或商品化試劑中標(biāo)準(zhǔn)品)的制備。
標(biāo)準(zhǔn)品是標(biāo)記免疫分析定量的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中,或各實驗室之間使用的標(biāo)準(zhǔn)品不一致,則可影響到實驗結(jié)果的可比性。為此,對標(biāo)記免疫分析所使用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)滿足如下要求。