IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,簡稱IgG)的主要成分之一,分子量約為15萬~16萬,沉降生活費數(shù)約為7s。IgG是動物和人體血漿的重要成分之一。血漿蛋白質的成分多達70余種,要從血漿中分離出IgG,首先要進行盡可能除去其他蛋白質成分的粗分離程序,使IgG在樣品中比例大為增高,然后再純化而獲得IgG。
對于研究細胞的科學人士來說,血清都不會陌生,其中胎牛血清是實驗操作的???。一般而言,胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后,發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺采血后,通過一系列工藝處理最終獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動消失。
通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol )等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據(jù)細胞類型判斷。
EMSA 主要基于蛋白-探針復合物在在凝膠電泳過程中遷移較慢的原理。根據(jù)實驗設計特異性和非特異性探針,當核酸探針與樣本蛋白混合孵育時,樣本中可以與核酸探針結合的蛋白質與探針形成蛋白-探針復合物;這種復合物由于分子量大,在進行聚丙烯酰胺凝膠電泳時遷移較慢,而沒有結合蛋白的探針則較快;孵育的樣本在進行聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉膜后,蛋白-探針復合物會在膜靠前的位置形成一條帶,說明有蛋白與目標探針有互作。
抗體保存得當與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當,大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。以abcam 抗體保存方法為主,同樣也可以應用到其他絕大部分的抗體產品!